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Existem vários tipos de testes de antígeno leucocitário humano (HLA). Cada tipo pode ser necessário com base na finalidade da condição médica ou compatibilidade de transplante. Os formatos em que esses testes estão disponíveis incluem os ensaios laboratoriais tradicionais, as tecnologias mais recentes em técnicas moleculares e alguns testes point-of-care.
Os principais testes de HLA incluem:
Tipagem sorológica
Este já foi o método mais comum de tipagem de tecido HLA. Utilizava anticorpos que interagem com moléculas HLA específicas nas próprias células. A amostra de sangue é então exposta a anticorpos específicos que se ligam a esses antígenos. Isso ajuda a identificar quais alelos estão presentes. A citometria de fluxo, que mede as características das células em uma amostra de fluido, é geralmente empregada para ler os resultados dos testes. Isso é mais eficaz do que apenas olhar sob um microscópio.
Tipagem molecular de HLA
Isto implica o uso de métodos baseados em DNA para identificar os variados alelos que são encontrados em cada locus HLA. É muito específico e, portanto, um teste clinicamente mais útil. Envolve principalmente a amplificação por PCR, seguida de técnicas como sequenciamento ou métodos baseados em hibridização para revelar quais genes HLA estão presentes.
Teste de crossmatch (prova cruzada)
Este é um teste crítico realizado principalmente antes de transplantes de órgãos. Verifica se o sangue do receptor pode produzir anticorpos contra as células do doador. Em um crossmatch positivo, as células do doador misturadas com o soro do receptor farão com que os anticorpos no soro reajam com as células, resultando na lise celular. Isso indica que a rejeição ocorrerá se esse órgão for transplantado.
Ensaios de detecção de anticorpos
Esses testes identificam e definem a presença de anticorpos HLA no soro do receptor. Pacientes altamente sensibilizados com múltiplas incompatibilidades HLA têm um risco maior de rejeição do enxerto. Portanto, é fundamental fazer tais testes para identificar quaisquer anticorpos específicos do doador que estejam presentes. Os métodos de detecção mais comuns incluem a tecnologia Luminex xMAP e os ensaios Single Antigen.
Teste HLA-B*57:01
Este teste verifica um alelo específico do gene HLA-B que está associado à hipersensibilidade ao medicamento antirretroviral abacavir. Assim, é empregado para evitar que este medicamento cause efeitos colaterais graves naqueles que carregam esse alelo.
Além dos consumíveis necessários para os testes, é preciso ter suprimentos para os aspectos processuais das metodologias e sua segurança e eficácia adequadas. Os principais suprimentos necessários para várias técnicas de tipagem HLA incluem:
Suprimentos para coleta de sangue
Para testes sorológicos de tipagem HLA e outras análises relacionadas, um profissional de saúde precisará coletar uma amostra de sangue de um paciente ou doador de transplante. Eles usarão, portanto, os seguintes suprimentos para coleta de sangue:
Tubos de coleta de sangue com anticoagulante: são tubos de vácuo especialmente tratados que impedem a coagulação do sangue. Eles geralmente têm uma tampa colorida que indica quais aditivos estão no tubo, por exemplo, tubos EDTA para separação de plasma, etc.
Seringas e agulhas: são usadas para obter a amostra de sangue de forma segura e eficaz. As agulhas devem ter a bitola correta para evitar hemólise e garantir o conforto do paciente.
Consumíveis de laboratório
Uma vez que o sangue é obtido, ele precisará ser executado através dos consumíveis de teste de laboratório HLA corretos, tais como:
Lâminas de microscópio e lamínulas: Nos testes sorológicos de tipagem HLA, as reações antígeno-anticorpo serão visíveis nessas lâminas.
Reagentes e controles: Todo laboratório tem que usar kits de teste de tipagem HLA específicos e seus materiais de controle de qualidade que os acompanham para fornecer resultados confiáveis.
Pipetas de plástico e ponteiras de pipeta: São usadas para medir e transferir diferentes volumes de amostras líquidas e reagentes.
Centrífugas e tubos de microcentrífuga: São usados para girar amostras de sangue para separar diferentes componentes, como soro para testes de sangue sorológicos que envolvem o soro. Também inclui tipagem HLA.
Suprimentos de citometria de fluxo: Estes incluem fluido de bainha e esferas de calibração para os citômetros de fluxo para realizar os testes sorológicos de tipagem HLA com precisão. Eles garantem que sejam bem limpos e padronizados.
Suprimentos de sacrifício
Os suprimentos para teste molecular de HLA incluem suprimentos para amplificação de PCR, tais como:
Kits de extração de DNA: São vitais para localizar uma sequência de DNA alvo na amostra de sangue de um paciente para identificar seus genes HLA. Eles geralmente têm enzimas e reagentes como proteinase K e buffers, etc., que lisarão as células e liberarão o DNA.
Reagentes de PCR: Os testes HLA PCR exigem primers específicos, dNTPs e DNA polimerase. Estes são geralmente encontrados em um kit HLA PCR que é usado nas amplificações.
Tal como acontece com outros testes laboratoriais, os consumíveis para testes moleculares de tipagem HLA devem incluir controles de qualidade e reagentes e consumíveis para manutenção e reparos para confiabilidade e segurança do equipamento.
Suprimentos bioinformáticos e tecnológicos
Os testes LSA, especialmente com tecnologia como PCR baseada em nuvem de tipagem HLA, exigem alguns suprimentos de suporte, como emissão e recuperação de informações, bem como análise apropriada, etc. Estes compreendem:
Dispositivos de computação: Há uma necessidade de computadores, interfaces e dispositivos de armazenamento para análise de dados, solução de problemas e armazenamento de resultados. Em ensaios baseados em Luminex, os leitores e o software empregados na análise de ponta a ponta exigem dispositivos de codificação.
O desejável é um relatório manual e automatizado e geração de transcrições. Existem requisitos de genótipos, fenótipos e relevância clínica em sistemas de gerenciamento de dados HLA que precisam de uma integração eficaz do sistema de informações de laboratório clínico (LIS).
Estes sistemas de apoio a decisões clínicas ajudam a interpretar os resultados HLA na estratificação de risco e transplante de um paciente.
Exposição à informática
Sejam materiais macios ou duros, todos os itens que entram em contato com sangue ou fluidos corporais devem ser manuseados adequadamente em termos de medidas e precauções de segurança. O sangue é potencialmente infeccioso e tem que ser tratado como tal. Deve-se usar equipamentos de proteção individual, como luvas e jalecos, ao lidar com tais materiais.
O descarte adequado de resíduos biológicos perigosos em sacos de resíduos clínicos ou recipientes para objetos cortantes é fundamental para evitar a exposição e a infecção. Acima de tudo, desinfetantes e medidas de segurança apropriadas devem estar prontamente disponíveis no caso de qualquer exposição acidental.
A escolha do teste HLA e as modalidades envolvidas dependem da situação clínica em questão. Diferentes tipos de suprimentos e kits de teste HLA classificam-se de forma diferente em suas vantagens, enquanto alguns combinam para testes específicos.
Finalidade do teste
Qual será a finalidade real da análise HLA? A tipagem HLA para transplantes de órgãos emprega principalmente técnicas sorológicas ou moleculares, como citometria e PCR. Estes fornecem resultados emparelhados mais rápido e com melhor precisão e reprodutibilidade.
Enquanto no teste de anticorpos HLA, os métodos mais comuns são os ensaios Single Antigen e Luminex. Ele pontua alto em sensibilidade, especificidade e rendimento.
No entanto, a fenotipagem, onde o objetivo é apenas conhecer os alelos no gene, é um método simples e mais barato. Devido à interdependência da finalidade do teste, deve-se obter os consumíveis e kits necessários para essa finalidade de teste em particular.
Capacidade e rendimento do laboratório
Com o aumento do número de pacientes para os quais você deseja fazer testes HLA, fatores como a eficiência dos kits de teste de tipagem HLA e a tecnologia utilizada tornam-se muito cruciais.
Técnicas moleculares como o sequenciamento de nova geração fornecem testes paralelos massivos e maior rendimento de pacientes.
No entanto, os métodos sorológicos podem ser mais apropriados em grandes laboratórios que lidam com muitos testes de tipagem HLA diariamente. Sua gestão eficaz e a economia de seu funcionamento serão melhores do que outras metodologias caras.
Fatores que afetam os resultados dos testes
Com todos os fatores metodológicos, há uma necessidade de consideração cuidadosa dos consumíveis para reduzir as chances de erros nos testes de laboratório HLA. É preciso garantir que os reagentes e anticoagulantes sejam do mesmo fabricante e estejam em conformidade com os protocolos recomendados.
Além disso, o treinamento e a padronização do pessoal envolvido no manuseio dos testes HLA em um laboratório molecular ou sorológico são muito necessários. Em particular, evite erros nas fases pré-analítica e analítica.
Orçamento e recursos
Considere fatores orçamentários ao comprar kits de teste HLA. Embora as técnicas moleculares possam ser mais caras para configurar, elas podem estar proporcionando maior eficiência nas pessoas manuseadas.
Quanto aos métodos sorológicos, será muito mais barato, mas com baixa eficiência no número de amostras que pode manipular.
Ao mesmo tempo, as ofertas comerciais de kits de tipagem e teste HLA têm que ser comparadas. Deve-se levar o seu tempo e avaliar quando se trata de custo, eficácia, sensibilidade, rendimento e precisão para aplicações clínicas adequadas.
R1: O antígeno leucocitário humano (HLA) é um conjunto de genes que codifica proteínas na superfície de todas as células nucleadas do corpo humano. Eles são responsáveis pela regulação do sistema imunológico e pelo processo de discriminação entre o próprio e o não próprio. Existem muitos tipos e variações diferentes dessas proteínas. Eles residem nos cromossomos 6 e constituem uma região altamente polimórfica do genoma humano.
R2: Os testes HLA são vitais para a aceitação do transplante de órgãos e tecidos e para a identificação da associação de doenças. Porque o sistema imunológico reconhecerá o órgão transplantado como estranho e o rejeitará se os antígenos HLA no doador e no receptor não corresponderem. Assim, o teste HLA ajuda a encontrar pares doador-receptor compatíveis que minimizarão a rejeição.
R3: Os métodos de tipagem HLA incluem as técnicas sorológicas tradicionais e os métodos mais recentes baseados em moléculas. O primeiro inclui métodos como crossmatch e teste de detecção de anticorpos. O último abrange métodos como PCR, sequenciamento NGS e até hibridização de oligonucleotídeos alelo-específicos. As técnicas sorológicas empregam antígenos e anticorpos, enquanto os métodos moleculares de tipagem HLA analisam as sequências de DNA dos genes para aumentar a precisão dos testes.
R4: A escolha dos métodos de teste HLA depende do que eles são necessários para em uma situação clínica e dos recursos disponíveis. Embora a tipagem sorológica seja a prática comum para testes de alto rendimento, as técnicas moleculares são consideradas mais apropriadas em testes personalizados de rotina devido à sua precisão. É preciso considerar as tecnologias a ter e outras restrições de recursos ao decidir sobre as técnicas a serem usadas na condução dos testes.
